换一批
换一批甲基营养菌MP688甲醛脱氢酶的表达、纯化及酶活性质
Expression, purification and enzymatic characteristics of aldehyde dehydrogenase from MP688
摘要目的 克隆甲基营养菌MP688甲醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase)基因adhA,在大肠杆菌中表达、纯化,并研究其酶学性质.方法 PCR扩增甲醛脱氢酶基因adhA,构建表达载体pTIG-AdhA,在BL21(DE3)中诱导表达,经Ni+亲和层析纯化,利用AHMT法进行体外酶学性质分析.结果 成功构建甲醛脱氢酶表达载体,在大肠杆菌中AdhA表达量达总蛋白的50%以上,其中大部分表达产物可溶,纯化得到纯度为95%的甲醛脱氢酶.甲醛脱氢酶能以甲醛为底物,最适pH为7.0,最适反应温度为30℃,室温保存6 d后酶活约保留60%.结论 在大肠杆菌中实现了甲基营养菌甲醛脱氢酶的可溶表达,在所考察的底物中,甲醛为该酶的最适底物.
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关键词
甲基营养菌属醛脱氢酶克隆纯化酶学性质methylobacterium extorquensaldehyde dehydrogenasecloningpurificationenzymatic charateristics
主题词
甲醛(Formaldehyde)氢(Hydrogen)醛脱氢酶(Aldehyde Dehydrogenase)甲基营养菌属(Methylobacterium extorquens)大肠杆菌(Escherichia coli)
分类号
Q939.1
栏目名称
论著
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2017.05.012
发布时间
2017-07-03
基金项目
国家自然科学基金资助项目
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