换一批
换一批摘要目的 证明肺癌细胞miRNA芯片中不存在高表达的miR-4454,而是来源于tRNAHis的同源序列16 nt小RNA,并对该16 nt小RNA生物学功能进行初步预测分析.方法 利用生物素标记的anti-miR-4454成熟体探针Northern印迹(NB)检测肺癌H460细胞内miR-4454成熟体及其前体,利用该探针钓取与之特异结合的RNA,测序确定该RNA的性质.Dicer酶体外切割tRNAHis,检测其切割产物并对切割产生的小RNA进行测序鉴定.在H460细胞中过表达tRNAHis来源的16 nt小RNA,通过转录组测序预测其生物学功能.结果 肺癌H460细胞中预测的miR-4454成熟体不存在,其前体序列与tRNAHis高度一致.Dicer酶体外切割tRNAHis能产生一条16 nt小RNA,序列鉴定与tRNAHis 3'端完全匹配,是一条新的tRNAHis来源小RNA.H460细胞中过表达tRNAHis来源的16 nt小RNA,转录组测序结果分析显示,tRNAHis来源的16 nt小RNA可能参与有丝分裂、细胞周期调控及碱基错配修复.结论 首次发现数据库预测的miR-4454在非小细胞肺癌细胞中不存在,证明它是来源于tRNAHis 3'端由Dicer酶切割产生的一种16 nt小RNA.过表达16 nt小RNA的转录组测序结果提示其可能参与细胞有丝分裂、周期调控及碱基错配修复.
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