换一批
换一批溶质载体家族成员SLC25A39基因促进乳腺癌细胞线粒体分裂
Solute carrier family member SLC25A39 gene promotes fission of mitochondria in breast cancer cells
摘要目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体,在获得Flag?SLC25A39融合蛋白表达后,研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响.方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列,双酶切后将其插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性的克隆再进行质粒提取,测序正确后将重组质粒与空载体分别转染人乳腺癌细胞ZR75?1.Western印迹鉴定SLC25A39目的基因的表达;Mitotracker对乳腺癌细胞的线粒体进行染色,共聚焦显微镜对线粒体进行观察;Western印迹检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达变化.结果 双酶切鉴定表明,Flag?SLC25A39真核表达载体构建成功;Western印迹验证SLC25A39基因表达成功;激光共聚焦显微镜下观察发现SLC25A39过表达的乳腺癌ZR75?1细胞分裂的线粒体较多;Western印迹证实SLC25A39基因过表达后线粒体分裂蛋白Fis1表达增高,线粒体融合蛋白Mfn1表达减弱.结论 成功构建带Flag标签的SLC25A39基因真核表达载体,该基因可促进人乳腺癌细胞的线粒体分裂,有望成为靶向线粒体治疗乳腺癌的潜在新靶点.
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分类号
R737.9
栏目名称
论著
DOI
10.7644/j.issn.1674⁃9960.2022.04.008
发布时间
2022-05-11
基金项目
国家自然科学基金
国家自然科学基金
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