换一批摘要目的 构建鼠疫耶尔森菌效应蛋白YopT-F296A、YopT-G298A、YopT-H303A、YopT-Y304F、YopT-F296A-G298A和YopT-H303A-Y304F 6种突变体的真核表达载体,并检测6种突变体对干扰素β(IFN-β)表达的调控.方法 以pCMV-Myc-YopT为模板,通过PCR技术分别扩增含有6种突变位点在内的yopT片段.扩增片段经核酸内切酶切割后连接到pCMV-Myc载体中构成重组质粒.重组质粒分别转染HEK293T细胞,免疫印迹检测表达水平,同时通过荧光素酶报告基因技术检测YopT及其6种突变体对IFN-β表达的影响.结果 6种yopT突变体重组质粒均在真核细胞中成功表达,并发现YopT及其6种突变体均能抑制IFN-β报告基因表达.YopT-C139R对IFN-β的表达没有明显抑制作用.结论 YopT 139位是影响IFN-β表达的关键位点,而YopT的296、298、303和304位不是影响IFN-β表达的关键位点.
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