换一批基于Cre-LoxP系统的高尔基体蛋白73胰腺特异性敲除小鼠模型建立与鉴定
Construction and identification of a pancreatic specific Golgi protein 73 knockout mouse model based on Cre-LoxP system
摘要目的 建立并鉴定高尔基体蛋白73(GP73)胰腺特异性敲除小鼠模型,为后续探究胰腺GP73的生理及病理功能提供基础.方法 采用受精卵同源重组的方式,将两个LoxP位点分别插入GP73基因4号外显子两端,建立GP73flox/+小鼠.将GP73flox/+小鼠与Pdx1Cre+小鼠杂交获得GP73flox/+Pdx1Cre+小鼠,经GP73flox/+小鼠与GP73flox/+Pdx1Cre+小鼠杂交获得的GP73flox/floxPdx1Cre+小鼠,即为所需模型小鼠.通过PCR鉴定flox及Cre基因型;采用实时荧光定量PCR(qPCR)及Western印迹分别从mRNA水平和蛋白水平鉴定胰腺GP73敲除效果及组织特异性;通过小鼠杂交后代的基因型统计分析,判断出生情况是否符合孟德尔遗传定律;通过计算小鼠各组织重量与体重的比例分析小鼠的生长发育情况.结果 通过小鼠杂交和PCR鉴定,成功获得GP73flox/floxPdx1Cre+小鼠.与对照小鼠相比,模型小鼠胰腺GP73的mRNA水平和蛋白水平显著降低,而其他组织无明显差异,表明模型小鼠建立成功.此外GP73flox/floxPdx1Cre+小鼠能正常出生,无胚胎致死现象,各组织的生长发育与对照小鼠无显著差异,可用于后续研究.结论 成功建立GP73胰腺特异性敲除小鼠模型,为胰腺GP73功能研究提供了重要实验材料.
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DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2023.07.002
发布时间
2023-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32270823）
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