一种基于A549细胞与内皮细胞共培养的新型气液培养模型的建立

Establishment of a novel air-liquid model based on the co-culture of A549 cells and endothelial cells

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摘要目的通过气-液界面(ALI)培养技术将人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549与内皮细胞共培养,探究内皮细胞存在条件下A549细胞表型和功能的变化.方法基于transwell培养体系建立气液共培养模型,A549细胞接种于transwell膜上表面,内皮细胞接种于transwell膜下表面,实时定量PCR(RT-qPCR)检测A549细胞经过传统ALI培养和ALI与内皮细胞共培养后的肺表面活性蛋白、细胞间连接以及与新冠病毒入侵细胞相关分子的表达,流式细胞术检测新冠病毒S蛋白截短体重组慢病毒的细胞感染率.结果通过比较分析,发现EA.hy926内皮细胞系较原代内皮细胞HUVEC更加适合建立新型ALI共培养模型.A549 细胞经过传统ALI培养后肺表面活性蛋白SP-B、SP-D的表达上调,促进上皮钙黏蛋白E、紧密连接蛋白表达,新冠病毒受体神经紧张素1、去唾液酸糖蛋白受体1、含kringle跨膜蛋白1显著上调;而在ALI与内皮细胞共培养体系中,上述基因的上调更加显著(P<0.05),模型病毒粒子感染率较传统ALI培养的A549细胞显著上升(P<0.05).结论成功构建A549细胞和EA.hy926内皮细胞共培养模型,为相关肺部疾病病理研究和药物筛选提供了新的研究模型.