换一批铜绿假单胞菌成孔毒素ExlA编码基因无痕缺失突变株的构建及其基本特性研究
Construction of the pore-forming toxin gene exlA knock-out mutant of Pseudomonas aeruginosa and its basic characteristics
摘要目的 构建铜绿假单胞菌NY8755 exlA基因无痕缺失突变株(NY8755ΔexlA),研究成孔毒素ExlA的基本特性.方法 利用二次同源重组的方法构建铜绿假单胞菌exlA基因无痕缺失突变株.选取6～8 周龄雌性C57BL/6J小鼠,经气溶胶肺递送途径分别感染铜绿假单胞菌NY8755和NY8755ΔexlA,记录感染后7d小鼠的生存状况和体重变化,检测小鼠肺泡灌洗液中的促炎因子.结果 经过测序验证,成功构建铜绿假单胞菌成孔毒素ExlA编码基因无痕缺失突变株.利用气溶胶肺递送途径感染小鼠(1×107 CFU)后,野生株组小鼠48h内全部死亡,突变株组48h后开始死亡且7d后仍有40%存活;突变株组存活小鼠体重先下降,后逐渐恢复;感染12h后野生株组小鼠肺泡灌洗液明显比突变株组血性渗出物更多(颜色更红),肺泡灌洗液中促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-17A(IL-17A)含量有显著差异.结论 铜绿假单胞菌成孔毒素ExlA是exlA阳性的新型铜绿假单胞菌的关键毒力因子,可显著影响小鼠的生存状况,引起小鼠体内明显的炎症反应.当前关于外毒素ExlA的致病机制研究较少,所构建的NY8755ΔexlA突变株及野生株和突变株肺炎小鼠模型,可为进一步探索exlA阳性的铜绿假单胞菌致病机制提供研究基础.
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DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2024.02.005
发布时间
2024-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
病原微生物生物安全国家重点实验室自主研究课题（SKLPBS2207）
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