换一批
换一批磷酰二胺吗啉代寡核苷酸固相合成工艺优化
Optimization of solid-phase synthesis process of phosphorodiamidate morpholino oligonucleotides
摘要目的 对磷酰二胺吗啉代寡核苷酸(PMO)固相合成工艺进行优化,确定最佳固相合成反应条件.方法 采用现有方法合成PMO四聚体PMO-TTTT,经过半制备高效液相色谱法纯化,并经核磁共振氢谱和高分辨质谱确证结构.利用纯化的PMO-TTTT作为标准品建立标准曲线,以此为基础对固相合成偶联反应过程中有机碱、添加剂、反应时间、反应温度等反应条件进行优化.使用优化后的条件合成抗甲型流感病毒PMO序列PMO-flu,并使用核酸纯化仪对样品进行纯化.结果 确立了有机碱N-乙基吗啉、添加剂LiI、反应温度30 ℃、反应时间90 min作为PMO固相合成的最佳反应条件,并以该反应条件合成了抗流感病毒PMO序列PMO-flu.结论 发现了一种能够有效提高PMO固相合成效率的偶联反应添加剂LiI,确立了 PMO固相合成工艺方法,为后续PMO的高效制备奠定了基础.
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关键词
固相合成磷酰二胺吗啉代寡核苷酸工艺优化solid-phase synthesisphosphorodiamidate morpholino oligonucleotidesprocess optimization
栏目名称
论著
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2024.09.004
发布时间
2024-10-23
基金项目
国家科技重点专项重大新药创制项目
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