脂氧合酶通过负调控自噬抑制新型布尼亚病毒感染

Lipoxygenase inhibits SFTSV replication by down-regulating autophagy

二维码有效期 120s

摘要目的探究脂氧合酶(LOX)对发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染的影响及作用机制.方法使用CCK-8法测定LOX对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活性的影响;实时定量PCR(qPCR)检测细胞内及上清中病毒RNA的复制;通过间接免疫荧光实验(IFA)观察HUVEC中SFTSV的感染率;Western印迹检测细胞内病毒核蛋白(NP)及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、5'-单磷酸腺苷(AMP)活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达变化,采用脂质代谢组学分析LOX处理SFTSV感染的人肝癌细胞系(Huh 7)后,细胞内代谢物的表达差异.结果 CCK-8结果显示LOX浓度低于8 mg/mL时,对HUVEC无明显细胞毒性.随着LOX浓度增加,胞内病毒RNA和NP蛋白的表达量逐渐降低,病毒感染能力逐渐减弱.SFTSV感染后LC3 Ⅱ蛋白的表达水平逐渐升高,激活自噬反应;与未处理组比较,经过LOX(2 mg/mL)处理后,SFTSV感染细胞的自噬程度减弱.经过LOX处理后,SFTSV感染细胞的中LC3 Ⅱ表达水平和AMPK磷酸化水平降低,mTOR磷酸化水平升高.结论 LOX通过抑制AMPK/mTOR信号通路负调控自噬反应,从而抑制SFTSV复制.