换一批抗流感病毒纳米抗体的制备及其在纳米抗体ELISA检测方法中的应用
Preparation of anti-influenza virus nanobodies and their applications in nanobody-ELISA
摘要目的 开发具有广谱性、特异性和高灵敏性的纳米抗体,用于检测多种亚型的甲型流感病毒,并建立纳米抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.方法 从美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库、纳米抗体数据库中检索到12株抗甲型流感病毒的纳米抗体基因序列,利用基因合成、重组表达等分子生物学方法,对纳米抗体进行蛋白表达.通过ELISA筛选和Gator亲和力分析确定这些纳米抗体的结合活性、特异性、灵敏性和亲和力.将筛选出的纳米抗体与1株传统鼠源的单克隆抗体配对,建立了双抗体夹心ELISA方法.结果 重组表达纯化出12株纳米抗体,筛选获得了2株可结合H1、H3、H5、H7、H9多亚型流感病毒的纳米抗体,编号为VHH54和KV108,与其他呼吸道病毒抗原无交叉反应.其中,KV108纳米抗体的结合亲和力最高,与H3N2亚型流感病毒核蛋白(NP)亲和解离常数为5.94×10-9mol/L,对NP抗原的最低检出浓度达0.00064 μg/mL.基于KV108纳米抗体和鼠源单克隆抗体INA108组合的双抗体夹心ELISA,可灵敏检测H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2等5种常见的甲型流感病毒亚型,最低检出限达110～403 PFU/mL.检测灵敏性显著高于商品化试剂.结论 鉴定出1株可广谱结合多种亚型流感病毒的纳米抗体KV108,并建立了可检测多种亚型流感病毒的纳米抗体ELISA方法,为开发基于纳米抗体的流感检测诊断技术提供了参考.
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分类号
R183.3（流行病学与防疫）
栏目名称
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2025.03.001
发布时间
2025-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
病原微生物生物安全全国重点实验室课题基金项目（SKLPBS2203）
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