摘要目的 基于Tat-GluA2-3Y的氨基酸序列,通过环化多肽、更换穿膜肽、替换D型氨基酸以及插入小分子质量聚乙二醇片段等策略设计并合成系列环肽,旨在提高环肽化合物的穿膜效率、稳定性及神经保护活性.方法 基于标准的Fmoc固相合成法合成目标多肽,并借助反相高效液相色谱(RP-HPLC)对多肽进行分析和纯化.采用HT-22细胞模型评价多肽的细胞保护活性.基于Caco-2单层肠上皮细胞模型测定多肽的跨膜转运效率.通过与大鼠血浆及人肝微粒体体外共孵育实验检测多肽的血浆和代谢稳定性.利用小鼠大脑中动脉闭塞模型评价多肽的体内神经保护活性.结果 基于标准的Fmoc固相合成法成功设计并合成7条环肽,经RP-HPLC分析,纯度均超过90%.细胞保护活性实验结果显示,在浓度≥125 nmol/L时,Tat-GluA2-3Y和CMT-C3Y均有活性,并且CMT-C3Y的活性优于Tat-GluA2-3Y.穿膜实验结果表明,与Tat-GluA2-3Y比较,CMT-C3Y在所有实验浓度下均表现出高度显著的穿膜能力(P<0.001),CMT-C3Y属于高渗透性药物,Tat-GluA2-3Y属于中等渗透性药物.血浆稳定性实验结果显示,Tat-GluA2-3Y与大鼠血浆共孵育4h的代谢率>50%,而CMT-C3Y共孵育8h后剩余量为88.1%,并未发生明显的降解现象;人肝微粒体稳定性实验结果显示,Tat-GluA2-3Y的半衰期为26.1 min,CMT-C3Y的半衰期为103.8 min,CMT-C3Y的半衰期更长,稳定性更好.Tat-GluA2-3Y和CMT-C3Y分别为快代谢药物、中等代谢药物.动物实验结果显示,在8 mg/kg的给药剂量下CMT-C3Y的神经保护活性显著优于Tat-GluA2-3Y(7.7%,P<0.001).结论 设计合成的双环肽CMT-C3Y相对Tat-GluA2-3Y具备更高的穿膜效率和更好的血浆稳定性,在细胞和动物水平展现出更好的神经保护活性.