换一批有机磷水解酶突变体的SUMO融合表达及活性评价
SUMO-fusion expressions and catalytic efficiency of an organophosphate hydrolase mutant
摘要目的 异源表达并纯化小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)标签融合的有机磷水解酶突变体H257Y/L303T(YT),即SUMO-YT,评价其水解乙基对氧磷和梭曼的能力.方法 通过酶切连接的方法,将SUMO标签编码基因与连接序列构建至YT编码基因的N端,并在大肠杆菌中表达SUMO-YT.通过硫酸铵沉淀及亲和层析等方法纯化SUMO-YT及YT,获得高纯度目的蛋白.分别以乙基对氧磷和梭曼为底物评价重组酶的活性及动力学参数.结果 成功构建重组酶的表达质粒并进行纯化,得到SUMO-YT及YT蛋白.SUMO-YT催化乙基对氧磷和梭曼的水解效率分别是YT的11倍和4.4倍.37 ℃、pH7.2条件下,当乙酰胆碱酯酶被梭曼完全抑制时,SUMO-YT处理3 min可使抑制率降为45.7％,而YT仅能降为80％.结论 成功制备高活性的重组SUMO-YT,SUMO标签融合可显著提高YT对乙基对氧磷和梭曼的水解能力.
更多相关知识
关键词
有机磷水解酶SUMO标签乙酰胆碱酯酶乙基对氧磷梭曼动力学参数organophosphate hydrolaseSUMO-Tagacetylcholinesteraseethyl paraoxonsomankinetic parameters
分类号
R994.6（毒物学《毒理学》）
栏目名称
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2025.08.006
发布时间
2025-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览8
- 被引0
- 下载2
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
