LC-MS/MS法测定人尿液中乳清酸的浓度及临床应用

Determination of the Concentration of Orotic Acid in Human Urine by LC-MS/MS and Its Clinical Application

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摘要目的:建立测定人尿液中乳清酸浓度的方法,并应用于临床.方法:尿液样本加水稀释100倍,经0.22 μm滤膜过滤后,取滤液100 μL加入甲醇400 μL沉淀蛋白,以卡马西平(0.50 μg·mL-1)2 μL为内标,经涡旋1 min,13000 r·min-1离心5 min,取上清液100 μL采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定.色谱柱为Waters Atlantis dC18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为5 mmol·L-1甲酸铵溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.50 mL·min-1,柱温为4℃,进样量为3 μL.采用电喷雾离子源以正离子及负离子模式,检测方式为Full MS,Full MS分辨率为70 000,质量扫描范围m/z 130～360.乳清酸和内标卡马西平的检测离子分别为m/z(-)155.00982、(+)237.10224.结果:乳清酸尿液浓度在0.016～1.0 μg·mL-1范围内线性关系良好(r2=0.9967),定量下限为0.016 μg·mL-1;日内、日间精密度的RSD<15%,RE<15%;基质效应为88.70%～98.62%;提取回收率为95.93%～103.08%;乳清酸尿液样品室温放置24 h、处理后样品4℃放置24h的稳定性良好(RE<15%).正常人尿液乳清酸含量为(3.10±1.23)μg·mL-1,鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症(OTCD)患者尿液乳清酸含量为354.82～2566.57 μg·mL-1.结论:本研究所建方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于OTCD患者的辅助诊断.