换一批
换一批NEDD9基因miRNA干扰质粒的构建及鉴定
Construction and identification of miRNA recombinant eukaryotic expression vectors of NEDD9
摘要目的 构建神经元表达发育下调基因9 (NEDD9)特异性微小核糖核酸(miRNA)干扰质粒,检测其在胃癌SGC-7901细胞中的干扰效果.方法 根据GenBank中提供的NEDD9基因序列,设计4种NEDD9靶向干扰序列(MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4)及1种阴性对照干扰序列(MR0112-N),连接到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建重组质粒.重组质粒转染人胃癌细胞株SGC-7901;采用FQPCR和Western blot法检测转染前后SGC-7901细胞中NEDD9mRNA及蛋白的表达.结果 测序表明,4种干扰质粒的干扰序列及读框完全正确.FQ-PCR和Westernblot结果显示,转染MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4质粒后其NEDD9表达较未处理组分别下降88.01％、96.70％、78.55％和81.34％ (P＜0.05),以MR0112-2干扰效果最为明显.阴性质粒组NEDD9 mRNA表达与未处理组比较无明显变化(P＞0.05).结论 成功构建了NEDD9干扰质粒,为进一步研究NEDD9基因表达在胃癌增殖、迁移、侵袭过程中的作用提供实验基础.
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