农杆菌介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转化金针菇的研究

Transformation of Flammulina velutipes with a basic fibroblast growth factor (bFGF) by Agrobacterium tumefaciens

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摘要构建了金针菇表达载体p139035S-bFGF,并将重组质粒转入到根癌农杆菌EHAl05中.以白金针菇Flammulinavelutipes菌丝球为受体材料,用根癌农杆菌介导转入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF).金针菇菌株对潮霉素(Hyg)抗性测验结果表明,在PDA固体培养基上的潮霉素筛选浓度为9μg/mL,在液体培养基中为6pg/mL.探索头孢霉素(Cefotaxime)对菌丝的毒性实验、农杆菌的菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)的添加及其浓度的控制、共培养的时间等因素对转化效率的影响.结果表明,Cef对金针菇菌丝几乎无抑制作用,最佳抑菌浓度为400μg/mL;农杆菌的菌液浓度OD600为0.5,侵染时间在30min左右,在AS为200μmol/L的共培养基上共培养72h,转化率最高.PCR与Southern杂交结果证明bFGF基因已整合到金针菇的基因组中.在无选择压力的PDA固体培养基上继代培养5次后仍检测到bFGF基因的存在,表明bFGF基因在转基因金针菇中稳定遗传.