摘要恩波吡维胺(pyrvinium pamoate,PP)是一种传统抗寄生虫药,与唑类联合具有协同抗烟曲霉作用.af-fadO(FAD binding oxidoreductase,FAD依赖性氧化还原酶)基因的编码产物在烟曲霉中推定为一种与FAD结合的氧化还原酶,可能参与真菌的氧化呼吸过程.通过敲除烟曲霉af-fadO基因,构建烟曲霉af-fadO基因的敲除株,揭示该基因及其编码蛋白在PP与唑类协同抗烟曲霉中的作用,并探索了其对烟曲霉药物敏感性和渗透压、氧化压力物质敏感性的影响.本研究采用同源重组构建出af-fadO基因的敲除盒,筛选出符合的烟曲霉af-fadO敲除株Δ af-fadO.利用纸片法和棋盘法观察该突变株与野生株 WT(ku80,pyrG+)在PP与唑类(泊沙康唑、伊曲康唑、伏立康唑)联合抗烟曲霉中的敏感性变化.同时,观察该突变株与野生株WT对氧化压力(H2O2 和甲萘醌)、渗透压物质(NaCl、D-山梨醇)敏感性的变化.体外联合药物敏感性试验结果显示Δ af-fadO对PP与泊沙康唑的分级抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)为 0.563,显示无相互作用,而对照组WT 对 PP 与泊沙康唑的 FICI 值为 0.5,存在协同作用.纸片法结果发现 PP 与泊沙康唑联合对Δ af-fadO的抑菌圈比对照组WT产生的抑菌圈直径明显变小,PP与泊沙康唑联合时对敲除株抑制作用更显著,差异有统计学意义(P<0.05).在渗透压和氧化应激的培养试验中,与野生株 WT 相比较,Δ af-fadO对氧化剂H2O2、甲萘醌、NaCl和D-山梨醇更敏感.敲除烟曲霉af-fadO基因后,其对氧化和渗透压力的敏感性增加,逆转了 PP 与泊沙康唑的协同作用,af-fadO可能是 PP 作用于烟曲霉的靶点.本研究丰富了PP协同唑类抗真菌的机制研究,为将来的临床应用奠定了基础.