换一批
换一批摘要建立了天冬氨酸消旋酶和D-氨基酸转氨酶双酶连续催化制备D-丙氨酸的方法.利用天冬氨酸消旋酶全细胞催化L-天冬氨酸消旋得到DL-天冬氨酸,离心去除天冬氨酸消旋酶全细胞后升温灭活残留的游离天冬氨酸消旋酶,再加入经镍柱亲和纯化的D-氨基酸转氨酶酶液,催化D-天冬氨酸(D-Asp)和丙酮酸(PA)经转氨反应生成D-丙氨酸.经单因素实验得到天冬氨酸消旋酶最佳催化条件为:反应温度40℃,0.2 mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH=7.0),底物L-天冬氨酸质量浓度为100 g/L.D-氨基酸转氨酶最佳催化条件为:反应温度42℃,0.2 mol/L磷酸钾缓冲液(pH=7.0),4 mmol/L磷酸吡哆醛,DL-天冬氨酸质量浓度为50 g/L,底物n(PA):n(D-Asp)=1:10.转化产物经等电点结晶和阳离子树脂分离得到D-丙氨酸.在该条件下,D-天冬氨酸转化率达94%,D-丙氨酸收率为84%,对映体过量值(ee值)=98%.
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关键词
双酶连续催化天冬氨酸消旋酶D-氨基酸转氨酶D-丙氨酸生物工程double enzyme continuous catalysisaspartic acid racemaseD-amino acid transaminaseD-alaninebiological engineering
分类号
Q55
栏目名称
生物工程
DOI
10.13550/j.jxhg.2017.10.009
发布时间
2017-11-30
基金项目
国家自然科学基金青年科学基金项目(21302100)National Natural Science Foundation of China
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