换一批鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究
Isolation and Primary Culture of Chicken Embryo Small Intestinal Epithelial Cells
摘要取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞.结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低；胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱；胶原酶Ⅰ单独消化50 min或嗜热菌蛋白酶单独消化110 min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块,经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,可获得较纯的上皮细胞.分离的细胞接种培养12 ～24 h贴壁,48～ 72 h细胞团中的细胞向四周蔓延,形成一群群的细胞集落,6～7d细胞汇合成片,成“铺路石样”,细胞多呈扁平多角状,椭圆状,单层生长,边界清晰,互不重叠.经形态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞.
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