换一批GST-CTCF 融合蛋白原核表达载体的构建及表达
Construction of Prokaryotic Expression Vector and for Expression of GST-CTCF Fusion Protein
摘要目的：构建人 CCCTC 结合因子（CCCTC-binding factor，CTCF）与谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transfer-ase，GST）重组蛋白的原核表达载体，并进行诱导表达。方法以 pEASY-T1-SIMPLE-CTCF 为模板，设计引入限制性酶切位点的 CTCF 引物，PCR 方法扩增目的片段，产物经限制性内切酶酶切后与原核表达载体 pGEX-4T-1连接，构建成 pGEX-4T-1-CTCF 原核表达载体，转化至大肠埃希菌 BL21中，经异丙基硫代-β-D 半乳糖苷（IPTG）进行诱导，Western blot 检测 GST-CTCF 融合蛋白的表达情况。结果经菌液 PCR、质粒双酶切分析、基因测序分析证实重组表达质粒 pGEX-4T-1-CTCF 构建成功，GST-CTCF 融合蛋白产物经 Western blot 鉴定为特异性表达。结论成功构建了 pGEX-4T-1-CTCF 原核表达质粒，获得特异性的 GST-CTCF 融合蛋白，为进一步研究转录因子CTCF 的功能奠定了基础。
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关键词
CTCF原核表达载体谷胱甘肽转移酶重组蛋白表达CCCTC-binding factorprokaryotic expression vectorglutathione S-transferaserecombinant protein expression
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发布时间
2015-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江西省自然科学基金（20114BAB215031）
江西省卫生计生委科技项目（20141152）
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