摘要目的 分析肝细胞肝癌(HCC)患者血清中感染乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的HepG2(HepG2.2.15)细胞外泌体(Exo)微小RNA-200(miRNA-200)的表达情况,及HepG2.2.15细胞中血管生成抑制蛋白-2(VASH2)表达水平,探讨miRNA-200、VASH2在HepG2细胞侵袭、迁移中的作用.方法 选取HCC患者15例(研究组)和健康受试者15例(对照组),比较2组血清Exo miRNA-200表达水平.从HepG2.2.15细胞中分离出Exo,随后将其分为过表达组(转染miRNA-200 mimic)和阴性对照组(转染miRNA-NC),采用透射电镜、Western blot和纳米颗粒跟踪进行Exo鉴定,采用qRT-PCR、Western blot检测各组HepG2.2.15细胞中VASH2表达情况.在补充Exo的HepG2细胞中分析过表达Exo组(miRNA-200过表达组的Exo)和对照组(未转染组的Exo)细胞的增殖、迁移、侵袭及细胞周期情况.在转染后12、24、48、72 h采用CCK-8法评估HepG2细胞增殖率;在转染后24h采用Transwell法评估HepG2细胞迁移和侵袭数量;在转染后48 h采用流式细胞术分析细胞周期,采用Western blot检测VASH2蛋白表达水平.采用荧光素酶报告基因检测评估miRNA-200是否靶向VASH2.结果 与对照组相比,研究组血清Exo miRNA-200表达水平显著降低(P＜0.01).与阴性对照组相比,过表达组 HepG2.2.15细胞的VASH2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01).过表达Exo组与对照组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P＞0.05),过表达Exo组迁移细胞和侵袭细胞数量较对照组显著减少(P＜0.01),HepG2细胞在Exo过表达前后G1期、S期、G2期分布差异无统计学意义(P＞0.05),过表达Exo组VASH2蛋白的相对表达水平显著低于对照组(P＜0.01).与miR-NC+VASH2 WT组相比,miRNA-200 mimic+VASH2 WT组的荧光素酶活性明显降低(P＜0.01),而miRNA-200 mimic+VASH2 MUT组与miR-NC+VASH2 MUT组的荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P＞0.05),表明miRNA-200靶向VASH2.结论 miRNA-200在HCC患者血清Exo中低表达,上调miRNA-200可抑制HepG2.2.15细胞VASH2表达,且过表达miRNA-200的HepG2.2.15细胞来源的Exo能够抑制HepG2细胞的侵袭和迁移.