换一批
换一批人HPIP基因真核表达载体的构建及其对肺癌细胞的生物学影响
Eukaryotic expression vector of human HPIP gene and its biological effect on lung cancer cells
摘要背景 人造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(hematopoietic pre-B cell leukemia transcription factor interacting protein,HPIP)参与多种肿瘤的发生发展过程,其在肺癌中的机制仍有待研究.目的 构建带有Flag标签的HPIP真核表达载体,表达pcDNA3.0-Flag-HPIP融合蛋白,检测其对肺癌细胞增殖、迁移等生物学功能的影响.方法 利用人乳腺文库作为模板,PCR技术扩增HPIP基因的编码序列,将其酶切产物连接到pcDNA3.0-Flag载体并测序.将重组质粒转染至A549肺癌细胞系中,Western blot验证转染后HPIP的蛋白表达情况.采用克隆形成实验、CCK-8法及细胞划痕实验等明确其对肺癌细胞增殖、迁移等功能的影响.结果 PCR扩增得长度为2109 bp的HPIP基因编码序列,并成功插入至pcDNA3.0-Flag载体中.测序和Western blot验证融合蛋白构建成功.CCK-8法和克隆形成实验表明,与对照组相比,转染Flag-HPIP后肺癌A549细胞增殖能力显著增强.划痕实验证实转染Flag-HPIP后可明显提高肺癌A549细胞的迁移能力.结论 本实验成功构建了带有Flag标签的HPIP基因真核表达载体,并证实其能够促进肺癌细胞的增殖和迁移,为后续HPIP在肺癌中的功能研究奠定了良好基础.
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