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黑色素纳米颗粒-丝素蛋白-单宁酸水凝胶的制备及其抗氧化性能检测

Preparation of melanin nanoparticles-silk fibroin-tannic acid hydrogel and detection of its anti-oxidant properties

摘要背景 在牙周软组织再生过程中,由于各种原因引起的氧化应激状态常导致组织修复迟滞,而传统修复材料对此疗效不佳.制备具有抗氧化功能的水凝胶材料,有希望为牙周软组织生物材料修复提供更多的选择.目的 制备黑色素纳米颗粒(melanin nanoparticles,MNPs)-单宁酸(tannic acid,TA)-丝素蛋白(silk fibroin,SF)复合水凝胶,检测MNPs含量对水凝胶微观形貌、抗氧化性能和细胞相容性的影响.方法 制备MNPs,将不同浓度的MNPs加入到SF,加入TA化学交联,得到MNPs-SF-TA复合水凝胶.根据水凝胶中MNPs浓度分为实验组MNPs1-SF-TA(1 mg/mL)、MNPs2-SF-TA(2 mg/mL)、MNPs4-SF-TA(4 mg/mL)和对照组SF-TA(0 mg/mL).通过扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察水凝胶表面形貌;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)法、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]法和Cu2+法检测其自由基清除能力和抗氧化能力;采用CCK-8和Calcein-AM/PI活/死细胞荧光染色法检测该水凝胶材料的细胞相容性.结果 成功制备了MNPs和MNPs-SF-TA复合水凝胶.DPPH、ABTS及Cu2+法均显示MNPs-SF-TA水凝胶对自由基的清除能力和抗氧化能力随MNPs浓度的升高而提高(P<0.05),4 mg/mL时达峰值.CCK-8结果显示:随观察时间延长,吸光度增强,细胞增殖活性增强;相同时间下各组细胞增殖活力随MNPs浓度升高而降低,MNPs2-SF-TA组显著高于MNPs4-SF-TA组(P<0.05);Calcein-AM/PI荧光染色结果与此一致.结论 成功制备了MNPs-SF-TA复合水凝胶,其中MNPs浓度为 2 mg/mL时,MNPs-SF-TA水凝胶具有较强的活性氧清除能力和良好的细胞相容性,有望成为牙周软组织修复的新型生物替代材料.

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