低温等离子体对铜绿假单胞菌毒力因子的作用研究
Effects of low temperature plasma on virulence factors of Pseudomonas aeruginosa
摘要背景 毒力因子的清除是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染治疗的棘手问题.低温等离子体(low temperature plasma,LTP)作为微生物灭活常用物理技术,对毒力因子的作用相关报道较少.目的 在离体环境下观察LTP对PA生物膜、毒素等毒力因子的作用规律,分析相关机制,并与医用紫外线(ultraviolet,UV)临床疗效进行对比.方法 将PA菌株解冻后行一定浓度的菌悬液配制和体外生物膜模型构建,随机分为LTP处理组和UV处理组.同时,LTP组根据0 min/5 min/10 min/15 min/20 min等照射梯度进行亚分组.平板计数法对生物膜PA进行计数;结晶紫和刚果红染色分别进行PA生物膜、弹性蛋白酶定量;H2DCFDA荧光染色法检测溶液活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;pH计测量PA溶液pH.结果 随着LTP处理时间的增加,平板计数结果显示,生物膜PA的数量下降(P<0.001),LTP 5 min生物膜PA菌落数量低于UV组(P<0.001);结晶紫和刚果红染色结果显示,生物被膜和弹性蛋白形成量下降(P<0.001),LTP 10 min时PA生物膜形成低于UV组(P=0.005),LTP 5 min弹性蛋白酶含量低于UV组(P=0.049);微环境特征结果显示,胞内ROS水平上升、溶液pH水平下降(P<0.001),LTP 5 min胞内ROS水平高于UV组(P=0.002),溶液pH水平低于UV组(P=0.034).结论 LTP可能通过诱导PA所在微环境的改变从而抑制其生物膜、毒素等毒力因子生成.
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