实时荧光PCR法在快筛外环境霍乱弧菌的应用
Application of real-time fluorescence PCR method in rapid screening of Vibrio cholerae in external environment
摘要探讨实时荧光PCR技术在快速筛检外环境自然界水体、水产品霍乱弧菌的应用价值,建立高效的霍乱疫情预警监测方法.采集自然界水体样品、甲鱼涂抹样品、养殖水样品共191份,按照第6版《霍乱防治手册》流程增菌8 h后采用实时荧光PCR技术进行霍乱弧菌初筛,将初筛阳性样品和二次增菌后检测阳性样品进行细菌分离培养、生化鉴定,以细菌培养法阳性为最终阳性结果.实时荧光PCR法显示,非O1/非O139霍乱弧菌在各外部环境样本中的总阳性率为50.3%,细菌培养法为31.4%.两种方法总体阳性结果相符率为62.5%,3 0份样品阴性相符率为96.7%.各类外环境样品实时荧光PCR技术霍乱弧菌检出率均高于细菌培养法.经Wilcoxon检验(Z=-2.803,P<0.01),二次增菌和初次增菌的实时荧光PCR法Ct值差异具有统计学意义,二次增菌可有效避免漏检.在进行外环境霍乱弧菌监测时,选择高效率、高灵敏度、高特异度的实时荧光PCR法作为初筛方法,可以有效减少细菌培养法工作量,提高外环境霍乱弧菌检出率,提升霍乱弧菌疫情监测预警速度,值得推广应用.
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