换一批应用新一代半导体靶向测序技术检测枫糖尿症致病基因突变的研究
Study on detection of pathogenic gene mutations in maple syrup urine disease by new-generation semiconductor targeted sequencing
摘要目的 应用Ion Torrent半导体靶向测序技术检测1例枫糖尿症(MSUD)患儿的致病基因突变 ,明确其致病突变 ,并探讨该技术用于复杂单基因病检测的可行性.方法 采集患儿外周血 ,提取基因组DNA ,经多重PCR扩增富集目的基因片段 ,构建平均片段大小为300 bp左右的文库 ,经乳液PCR及磁珠颗粒富集 ,最后采用318半导体测序芯片进行高通量测序 ,应用Ion Torrent Suite v3 .0软件进行数据提取、序列比对及SNPs和Indels提取 ,再用dbSNP 137数据库过滤得到SNPs和Indels ,可疑突变经Sanger法测序验证.结果 检出患儿1个新发错义点突变并通过Sanger测序验证 ,突变是BCKDHB基因第6外显子的 NM183050:c .586C> T (p .His196Tyr).结论 Ion Torrent半导体靶向测序技术可对复杂单基因遗传病进行快速、准确地基因诊断.
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关键词
枫糖尿症支链氨基酸α-酮酸脱氢酶复合体基因IonTorrent半导体靶向测序技术maple syrup urine diseaseBCKDHB geneIon Torrent semiconductor targeted sequencing
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DOI
10.3969/j.issn.1672-9455.2016.02.007
发布时间
2016-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省医学创新团队与领军人才课题（(LJ201109)）
江苏省临床医学重点项目（(BL2012039)）
江苏省卫生厅医学科研项目课题（(H201343)）
江苏省南京市医学重点科技发展项目（(201405041)）
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