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基于双重CRISPR-Cas12a的新型冠状病毒核酸胶体金检测试纸条的研制

Development of a SARS-CoV-2 nucleic acid colloidal gold test strip based on dual-CRISPR-Cas12a

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摘要目的为实现快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2),干预和防止病毒的传播,研制一种基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条.方法通过设计基于ORF1ab和N基因靶序列内的正反两个依赖原间隔邻近基序(PAM)位点crRNAs,将恒温扩增技术与CRISPR-Cas12a检测相结合,并结合侧向层析试纸条技术,实现对SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因同时扩增与双重CRISPR的可视化检测.结果检测试纸条可在37 ℃条件下20 min内取得结果,具有较好的灵敏度、特异度及热稳定性.对SARS-CoV-2假病毒的检测灵敏度为250 copy/mL,检测16种其他呼吸道病原体均无交叉反应,在37 ℃条件下存放8 d仍然具有较好检测效果.临床研究显示,检测SARS-CoV-2总符合率为95.00％(57/60).结论基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条提高检测效率和准确度的同时降低了成本,可用于SARS-CoV-2的现场快速检测.

作者黄涛 ^[1] 魏道舜 ^[1] 钱纯亘 ^[2] 李永聪 ^[1] 刘仲明 ^[3] 李辉军 ^[4] 汪大明 ^[5] 张赛 ^[1] 学术成果认领

作者单位深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司,广东深圳 518116 ^[1] 华中科技大学生命科学与技术学院,湖北武汉 430074 ^[2] 中国人民解放军南部战区总医院医学实验科,广东广州 510010 ^[3] 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科,湖北武汉 430030 ^[4] 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所,江苏苏州 215163 ^[5]

关键词新型冠状病毒重组酶聚合酶等温扩增成簇规律间隔短回文重复序列相关核酸内切酶12a 胶体金免疫层析快速检测 SARS-CoV-2 isothermal amplification of recombinant polymerase CRISPR-Cas12a colloidal gold immunochromatography rapid detection

分类号 R446.5（诊断学）

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1672-9455.2023.21.006

发布时间 2023-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

广东省深圳市科技创新委员会资助项目（2020254008）广东省深圳市龙岗区科技发展资金资助专项（LGKCXGZX2020012）