换一批新型冠状病毒Omicron I1566V突变位点MS2噬菌体病毒样颗粒的构建
Construction of MS2 phage virus-like particles with Omicron I1566V mutation site of SARS-CoV-2
摘要目的 构建新型冠状病毒Omicron I1566V突变位点 MS2噬菌体病毒样颗粒.方法 选取并合成带有6×His标签的MS2噬菌体的衣壳蛋白(CP)、成熟蛋白(A蛋白)及Omicron I1566V突变基因序列,插入pACYCDuet-1质粒构建重组载体,通过原核系统诱导表达目的蛋白,纯化重组蛋白后利用透射电镜对蛋白质进行物理表征,最后通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测病毒样颗粒的热稳定性及耐核酸酶水解能力.结果 成功构建包含有6×His标签的CP、A蛋白和Omicron I1566V突变基因序列的重组载体,经限制性内切酶BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ酶切鉴定和测序验证,结果均与预期相符.经诱导并纯化后,通过电镜观察到了大小均匀、直径为23～28 nm的病毒样颗粒,该病毒样颗粒经核酸酶消化后可在37℃条件下稳定储存20 d以上.结论 该研究成功利用MS2噬菌体的CP和A蛋白构建了Omicron I1566V突变位点病毒样颗粒,为该突变位点的RT-PCR检测体系提供了可靠的质量保障.
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关键词
新型冠状病毒变异株Omicron I1566V突变位点反转录聚合酶链反应MS2噬菌体病毒样颗粒SARS-CoV-2 variantsOmicron I1566V mutationreverse transcriptase polymerase chain reactionbacteriophage MS2virus-like particles
分类号
R563.1（呼吸系及胸部疾病）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-9455.2024.08.002
发布时间
2024-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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