摘要目的 探讨miR-199a-3p通过调控人乳腺癌易感基因1(BRCA1)影响小细胞肺癌(SCLC)细胞对阿帕替尼敏感性的机制.方法 选择人SCLC细胞系H446、H1688以及正常支气管上皮细胞BEAS-2B进行培养,构建阿帕替尼耐药SCLC细胞系(H446/APA和H1688/APA),将H446/APA和H1688/APA细胞分为未转染和转染(转染的核酸分子包括miR-199a-3p mimics、miR-NC、sh-BRCA1、sh-NC).采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常支气管上皮细胞BEAS-2B、H446、H1688、H446/APA、H1688/APA及转染 miR-199a-3p mimics、转染 miR-NC 的 H446/APA、H1688/APA 细胞中 miR-199a-3p 表达水平.采用蛋白质印迹法检测正常支气管上皮细胞BEAS-2B、H446、H1688、H446/APA、H1688/APA及转染不同核酸分子的H446/APA、H1688/APA细胞中BRCA1蛋白表达水平.采用噻唑蓝溴化四唑(MTT)法测定H446、H1688、H446/APA、H1688/APA及转染不同核酸分子的H446/APA、H1688/APA细胞对阿帕替尼的半数最大抑制浓度(IC50)值,测定转染不同核酸分子的H446/APA、H1688/APA细胞活力.通过集落形成测定分析转染不同核酸分子的H446/APA和H1688/APA细胞集落数.通过流式细胞术检测转染不同核酸分子的H446/APA和H1688/APA细胞的凋 亡率.通过Transwell实验测定转染不同核酸分子的 H446/APA、H1688/APA细胞的迁移和侵袭情况.通过双荧光素酶报告基因检测系统测定荧光素酶报告基因载体的荧光素酶活性,分析miR-199a-3p与BRCA1之间的联系.结果 与正常支气管上皮细胞BEAS-2B相比,人SCLC细胞系 H446、H1688、H446/APA、H1688/APA 细胞中 miR-199a-3p 表达水平均降低(P＜0.05),而 BRCA1蛋白表达水平均升高(P＜0.05).与对应的亲代细胞相比,H446/APA和H1688/APA细胞中miR-199a-3p表达水平均降低(P＜0.05),并且BRCA1蛋白表达水平均升高(P＜0.05).转染不同核酸分子的同一细胞系(H446/APA、H1688/APA)中:转染miR-199a-3p mimics的细胞中miR-199a-3p表达水平均明显高于转染miR-NC的细胞(P＜0.05);转染miR-199a-3p mimics的细胞中BRCA1蛋白水平、IC50值、细胞活力、细胞集落数、细胞凋亡率、细胞迁移数、细胞侵袭数与转染miR-199a-3p mimics+sh-NC的细胞相比,差异均无统计学意义(P＞0.05);转染 miR-NC、转染 miR-199a-3p mimics+sh-BRCA1 的细胞中 BRCA1 蛋白水平、IC50值、细胞活力、细胞集落数、细胞迁移数、细胞侵袭数均高于转染miR-199a-3p mimics、转染miR-199a-3p mimics+sh-NC 的细胞(P＜0.05),细胞凋亡率均低于转染 miR-199a-3p mimics、转染 miR-199a-3p mimics+sh-NC 的细胞(P＜0.05);与转染miR-NC的细胞相比,转染miR-199a-3p mimics+sh-BRCA1的细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),而细胞集落数、细胞迁移数、细胞侵袭数明显降低(P＜0.05),但转染miR-NC与转染miR-199a-3p mimics+sh-BRCA1的细胞中BRCA1蛋白水平、IC50值、细胞活力比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).荧光素酶基因报告结果显示,转染miR-199a-3p mimics的H446/APA、H1688/APA细胞中含有 WT-BRCA1报告基因质粒的荧光素酶活性均低于转染miR-NC的同一细胞系(P＜0.05).结论 miR-199a-3p可通过靶向调控BRCA1水平而增强SCLC细胞对阿帕替尼的敏感性,为改善SCLC的化疗效果提供潜在的靶点.