换一批H5N1亚型AIV HA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析
High Level Expression and Antigenic Analysis of H5N1 AIV Hemagglutinin Epitopes
摘要血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义.本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIV HA 基因编码的氨基酸序列进行分析,在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后,构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a(+)-HA.经测试,该重组质粒在1 mmol/L IPTG诱导剂作用下诱导过夜,能在大肠杆菌Rosetta-gami B (DE3)中高效表达,并得到48.1 kD大小的目的重组表达蛋白.重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后,与福氏佐剂等量混合制备成抗原,以200 μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次,采血分离血清.Western-Blot试验结果表明,该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应,在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带.说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,保留了HA蛋白的抗原活性,提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值.
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分类号
S852.65
栏目名称
DOI
10.3969/gab.031.000109
发布时间
2012-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
桂渔牧科09254-18（09254-18）
广西特聘专家项目（2011B020）
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