换一批摘要碳水化合物结合组件(carbohydrate-binding module,CBM)是某些碳水化合物活性酶(carbohydrate-active enzymes)上的非催化部分,主要负责与底物特异性结合以提高与之相邻的催化结构域对不可溶底物的催化效率.CBM中的保守芳香族氨基酸通常是这些蛋白的底物结合位点,利用氨基酸定点突变技术可用来寻找和验证CBM中的结合位点的关键氨基酸.本研究的前期工作发现CBM46200与其同家族的其它成员相比对底物结合的能力要弱很多,多重序列比对发现家族中某些保守的芳香族氨基酸在CBM46200被非芳香族氨基酸替代,这可能是CBM46200与底物结合能力弱的原因,探究这些原因对研究前期工作中所鉴定的新家族CBM的广泛特异性具有重要意义.在本研究中利用氨基酸定点突变技术、亲和凝胶电泳技术以及蛋白对不可溶多糖的吸附技术等对前面的推论予以验证.结果表明,CBM46200的定点突变体对多糖底物的结合能力并没有增强,有些甚至还减弱了,这说明这些非芳香族氨基酸在CBM46200中的替代不是造成CBM46200对多糖的结合能力弱于其它家族成员的原因,可能还存在其它的因素影响CBM46200对底物的结合能力,本文对这些可能的因素也做了推测.
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关键词
碳水化合物结合组件定点突变芳香族氨基酸结合能力Carbohydrate-binding modules (CBM) Site-directed mutagenesis Aromatic amino acids Binding capacity
栏目名称
DOI
10.13417/j.gab.033.000808
发布时间
2014-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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