换一批甘蔗黄叶病毒P0蛋白基因细菌双杂交诱饵载体的构建和自激活鉴定
Bait Plasmid pBT-P0 Construction and Its Self-activation Identification in Bacterial Two-hybrid System
摘要由甘蔗黄叶病毒所引起的甘蔗黄叶病是甘蔗生产中潜在的重要病毒病害之一.该病毒属黄症病毒科(Luteoviridae)中的马铃薯卷叶病毒属(Poleroviruses).根据甘蔗黄叶病毒海南分离物(SCYLV-CHN-HN1)全基因组序列(GenBank No.HQ342888),设计P0蛋白基因的一对特异性引物P0-BaitF/P0-BaitR.以实验室保存的重组质粒pMD 18T-P0为DNA模板,PCR扩增P0蛋白基因.然后将P0蛋白基因和细菌双杂交诱饵质粒pBT分别进行双酶切后,连接构建重组诱饵质粒pBT-P0.经PCR扩增、双酶切鉴定和序列分析,表明获得了细菌双杂交重组诱饵载体pBT-P0,且编码框正确.将重组载体pBT-P0转化细菌双杂交系统BacterioMatchRⅡScreening Reporter感受态细胞,进行自激活和毒性验证.结果显示pBT-P0重组载体在细菌双杂交系统中无自激活作用及毒性作用,表明本试验构建的pBT-P0可应用于该系统筛选与之互作的寄主蛋白.
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DOI
10.13417/j.gab.034.000836
发布时间
2015-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
现代农业产业体系建设甘蔗专项（nycytx-24）
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（ITBB110303）
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