换一批关岭牛MyoD基因原核表达载体的构建及生物信息学分析
Bioinformatics Analysis of Guanling Cattle MyoD Gene and Construction of Its Prokaryotic Expression Vector
摘要本实验采用RT-PCR方法克隆关岭牛MyoD基因的CDS区,利用EcoR Ⅰ、Xho Ⅰ酶对目的片段与pET32a(+)原核表达载体进行酶切,T4连接酶连接过夜,通过转化,测序,构建重组表达载体,并对该基因进行相关生物信息学分析.实验结果获得了关岭牛MyoD基因CDS区,成功构建了pET-32a(+)-MyoD重组表达载体.MyoD基因编码区为954 bp,编码318个氨基酸,共有31个稀有密码子,表达蛋白大小为34.2 kD.该蛋白为水溶性蛋白,等电点pI=5.8,在体内带负电,二级结构中α-螺旋、无规则卷曲较多.蛋白没有信号肽和明显的跨膜区,为胞内蛋白,主要存在于细胞核中.重组载体表达的MyoD蛋白带有His等标签,蛋白大小为53.6 kD,共497个氨基酸.实验对关岭牛MyoD蛋白的理化性质、结构特点进行了初步分析,以期为研究牛MyoD蛋白特性及其作用机制奠定理论基础.
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关键词
关岭牛MyoD基因原核表达载体生物信息学Guanling cattleMyoD geneProkaryotic expression vectorBioinformatics analysis
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DOI
10.13417/j.gab.034.001413
发布时间
2015-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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