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芥蓝八氢番茄红素合成酶基因BaPSY1的克隆及原核表达

Cloning and Prokaryotic Expression of Phytoene Synthase Gene in Brassica alboglabra

摘要本研究根据NCBI公布的白菜、甘蓝等近源物种的同源基因序列设计特异性引物,采用反转录PCR法从‘明丰香菇’芥蓝中克隆到八氢番茄红素合成酶基因BaPSY1,测序结果表明该序列长为1 251 bp,编码氨基酸416个,理论分子量为46.53 kD,等电点为8.83.序列比对发现,芥蓝BaPSY1氨基酸序列与油菜、甘蓝、白菜等十字花科植物相似性较高,达到89%以上,与番茄、甜橙等其他园艺植物的相似性也均超过70%;同源进化树分析表明芥蓝BaPSY1与油菜PSY位于同一分支,亲缘关系最近.此外,芥蓝BaPSY1基因序列中稀有密码子数量较多,所占比例达到11.53%,通过构建原核表达载体pEA SY-Blunt El-BaPSY1,将其转入含稀有密码子的感受态细胞Transetta (DE3)中诱导,最终成功获得了BaPSY1特异性表达蛋白,并且主要以包涵体形式存在.研究结果为揭示芥蓝BaPSY1基因功能提供依据.

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