肝特异性表达hNPC1L1真核表达载体的构建
Construction of Eukaryotic Expression Vector in Liver-Specific Expression of hNPC1L1
摘要为进一步研究NPC1L1在代谢性疾病尤其是脂代谢紊乱中具体的分子机制,本研究以pEGFP-C1质粒为模板,通过PCR扩增出Neor/Kanr基因片段,并对pLiv-11质粒和PCR扩增产物进行酶切,用T4DNA连接酶连接Neor/Kanr、pLiv-11和hNPC1L1基因片段,最终构建了含有表达质粒的重组菌株JM109(pLiv-11-Neor/Kanr-hNPC1 L1).酶切鉴定和序列分析结果表明,构建的pLiv-11-Neor/Kanr-hNPC 1L1重组质粒含有hNPC1L1 (human Niemann-Pick C1 like 1)基因且基因序列和开放阅读框架均正确.本研究成功构建了肝特异性表达hNPC 1L1的真核表达载体,为培育hNPC 1L1表达转基因巴马小型猪奠定了一定基础,有利于阐释NPC1L1的调控机制以及揭示肝脂肪代谢相关疾病的发病机制.
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