换一批Pfu DNA聚合酶的表达条件优化及纯化研究
The Expression of Pfu DNA Polymerase Conditions Optimization and Purification Research
摘要Pfu DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的高保真DNA聚合酶之一.本研究对重组菌株的Pfu酶基因表达条件进行优化,以提高Pfu DNA聚合酶的表达效率.通过在菌液深度OD600=0.87时加入1.5 mmol/L的IPTG进行诱导培养,诱导培养时间为11.03 h,用酶溶法对重组菌株进行破胞提取粗酶液,经热变性法与盐析沉淀法对杂酶进行纯化,最后经过透析后得到纯酶.采用考马斯亮蓝G-250法对酶进行含量测定及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,最后使用PCR反应检测提纯后的Pfu酶的活性.结果 表明优化处理后制各的Pfu DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Pfu DNA聚合酶水平.本研究为Pfu DNA聚合酶的开发和利用奠定了基础.
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DOI
10.13417/j.gab.038.005458
发布时间
2020-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省大学生攀登计划项目（pdjhb0338）
广东省大学生攀登计划项目（pdjhb0343）
重点项目（pdjh2019b0323）
国家级大学生创新创业训练计划项目
国家自然科学基金（31470677）
广东省自然科学基金（2017A030307017）
广东省科技计划（2017A030303087）
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