换一批鸭SCD-1基因启动子的克隆与转录活性分析
Cloning and Transcriptional Activity Analysis of Duck SCD-1 Gene Promoter (Anas platyrhynchos)
摘要本研究旨在通过克隆获得鸭(Anas platyrhync hos)SCD-1基因启动子序列,预测其生物学信息,并探究鸭SCD-1基因的转录调控机制,为改善畜禽机体脂肪沉积的研究提供新思路.利用在线启动子分析软件对SCD-1基因启动子区序列信息进行分析,以三穗鸭DNA为模板,设计特异性引物,进行PCR扩增、测序,进而构建pGL3+启动子的表达载体,转染PC3细胞并进行双荧光素酶报告基因检测,然后以浓度梯度为0(对照)、10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L、40μmol/L、50 μmol/L的亚油酸和EPA作为外源刺激因子刺激启动子.试验结果显示,SCD-1基因启动子区域(位于g.951648～g.952634)分别有CAAT-box和GC框各1个和4个转录因子结合位点(TFIID,CAAC-binding-f, AP-2,ER和NF-1);启动子转录活性序列强弱依次为pGL3-basic-S1 ＞pGL3-basic-S4＞pGL3-S2＞pGL3-basic-S3.鸭SCD-1基因启动子在亚油酸和EPA的刺激下转录活性显著增强(p＜0.05),其中当亚油酸和EPA浓度在10 μmol/L时,鸭SCD-1基因启动子的转录活性最强,总体上相同浓度梯度亚油酸和EPA刺激启动子时,EPA对鸭SCD-1基因启动子转录活性的作用弱于亚油酸.本实验初步确定了该基因的启动子区域,并成功构建了4个具有转录活性的鸭SCD-1基因启动子表达载体,为进一步研究SCD-1基因转录调控机制提供理论依据.
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