换一批
换一批甜菜夜蛾Secrt基因克隆及其对甜菜夜蛾核型多角体病毒DNA复制的影响
Cloning of Secrt Gene from Spodoptera exigua and Its Effect on DNA Replication of Spodoptera exigua Multiple Nucleopolyhedrovirus
摘要钙网蛋白(calreticulin,CRT)是一类真核生物中高度保守的Ca2+结合蛋白,在病毒复制中起重要作用.为研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)Secrt基因及其在甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multi-ple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)感染细胞中的作用,本研究以宿主Se301细胞cDNA为模板,通过无缝克隆技术获得Secrt基因的完整开放阅读框1 200 bp,其编码399个氨基酸.SeCRT蛋白的相对分子量为45.86 kDa,生物信息学分析发现其含有信号肽、无跨膜结构域,含有2个O-糖基化位点及28个磷酸化位点,C结构域末端具ER驻留信号HDEL,是定位于内质网上的亲水性蛋白质.以最大似然法(Maximum likelihood method)构建系统进化树,聚类结果表明SeCRT与其他鳞翅目(Lepidoptera)昆虫CRT聚为一类,其中与斜纹夜蛾(Spodoptera litura)CRT的相似性高达98.25％.实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测表明,SeMNPV感染Se301细胞后,其Secrt基因表达在mRNA水平上呈现先降低后升高最终趋于平稳的趋势,表明Secrt基因响应病毒的感染.随后通过RNAi干扰技术敲低Secrt基因,发现SeMNPV病毒DNA复制减少43.4％,表明Secrt基因影响病毒DNA复制.研究结果为进一步阐明宿主基因Secrt在SeMNPV感染中的分子机理及病毒和宿主间相互作用机制奠定基础.
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