换一批基于抗体融合荧光蛋白的镰刀菌免疫检测技术
Immunological Detection Technology for Fusarium Based on Antibody Fusion Fluorescent Proteins
摘要镰刀菌(Fusariam)是一类重要的植物病原菌和临床上常见的致病真菌,为实现镰刀菌的快速灵敏检测,本研究通过基因工程操作技术将编码抗镰刀菌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)FvSG7的基因与mNenoGreen(mNG)绿色荧光蛋白和NanoLuc(NLuc)荧光素酶基因构建融合表达载体,优化原核表达条件后进行大量表达纯化;利用SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白FvSG7-mNG-NL的表达情况;利用免疫荧光分析融合蛋白与镰刀菌菌丝的结合特性;利用酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析融合蛋白与镰刀菌抗原的结合能力.结果显示,融合荧光蛋白FvSG7-mNG-NL的原核表达载体构建成功,并实现可溶性高效表达.FvSG7-mNG-NL保留单链抗体、荧光素酶以及荧光蛋白的活性,可通过生物发光共振能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)增强发光成像.本研究为发展镰刀菌的灵敏快速免疫检测技术奠定了实验基础.
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关键词
镰刀菌单链抗体荧光素酶融合蛋白免疫学检测FusariumSingle-chain variable fragment(scFv)LuciferaseFusion proteinImmunological detection
栏目名称
DOI
10.13417/j.gab.043.001850
发布时间
2025-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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