摘要许多正链RNA病毒通过劫持宿主细胞的磷脂酰肌醇 4-激酶β(phosphatidylinositol 4-kinase beta,PI4KB)来富集磷脂酰肌醇 4-磷酸(phosphatidylinositol-4 phosphate,PI4P),进而促进病毒的复制.为探究PI4KB是否影响禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的复制,本研究首次制备针对鸡源PI4KB蛋白的兔多克隆抗体,并通过间接 ELISA和Western blot对获得的多克隆抗体进行鉴定;在此基础上,进一步过表达和干扰表达PIKB蛋白,以探究其对IBV复制的影响.结果显示,选择鸡源PI4KB蛋白第 473～826 位氨基酸作为原核表达序列,成功构建了原核表达质粒pCzn-1-PI4KB,表达出PI4KB蛋白并制备了多克隆抗体,ELISA结果显示制备的PI4KB兔多克隆抗体效价为 1∶51 200,Western blot结果验证其具有良好的反应性和特异性,可用于细胞层面研究PI4KB对IBV复制的作用;将包含PI4KB功能结构域的编码区(coding sequence,CDS)作为真核表达序列,成功构建了真核表达质粒pVax-mCherry-PI4KB,并在BHK-21 细胞中成功过表达PI4KB蛋白;相较于感染组和空载体感染组,过表达 PI4KB后,IBV病毒载量、N蛋白表达水平以及病毒滴度均显著提高(P<0.05);反之,干扰表达PI4KB后,IBV病毒载量、N蛋白表达水平以及病毒滴度均显著降低.这表明过表达PI4KB能显著促进IBV的复制,而干扰表达PI4KB则能显著抑制IBV的复制.本研究为深入理解PI4KB的生物学功能以及探究IBV感染和致病新机制奠定了基础,同时为寻找IBV新的抗病毒药物靶点提供了理论依据以及新思路.