白木香AsPKS4互作蛋白的筛选和鉴定分析
Screening and Identification Analysis of AsPKS4 Interacting Proteins in Aquila-ria sinensis
摘要白木香(Aquilaria sinensis)形成沉香的过程伴随着 2-(2-苯乙基)色酮类化合物的积累.研究表明,白木香聚酮合酶AsPKSs是 2-(2-苯乙基)色酮类化合物合成通路中的关键酶.本研究克隆了AsPKS4 基因,利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位进行分析;利用酵母双杂交筛库从白木香cDNA库中筛选AsPKS4 的互作蛋白,分析注释筛选到的互作蛋白并克隆互作蛋白AsKIN10 的CDS序列进行酵母双杂交点对点验证.生物信息学分析结果显示,AsPKS4 为亲水蛋白,无信号肽,无跨膜结构,含有Cys-His-Asn催化三联体,存在30 个磷酸化位点;酵母双杂交筛库筛选到7 个AsPKS4的互作蛋白,包括PTS1 的受体蛋白 PEX5、隔膜定位蛋白 MinD、热激蛋白 DJB13L、转录因子 LSH10、SnRK1 的 α 亚基KIN10 以及两个未表征的蛋白;酵母双杂交进一步验证了AsKIN10 与AsPKS4 之间的蛋白相互作用;对AsKIN10 进行的亚细胞定位实验表明其定位在细胞质和细胞核.综合实验结果显示本研究为AsPKS4 筛选到了 7 个互作蛋白,为解析沉香 2-(2-苯乙基)色酮的合成通路和调控机制的研究奠定了基础.
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