摘要目的 探讨瑞香素(Dap)对胃癌细胞的抑制作用及其机制.方法 通过MTT实验检测浓度为0、30、60、90、120、150 μmol/L 的Dap处理胃癌AGS细胞48 h后对细胞存活率的影响.将AGS细胞分为A~E组,分别用0、30、60、90、120、150 μmol/L的Dap培养48 h,通过光镜和结晶紫染色观察各组细胞数量和细胞形态的变化情况.DCF染色评估Dap对A~D组AGS细胞内活性氧(ROS)水平的影响.JC-1染色评估Dap对A~D组AGS细胞内线粒体膜电位(MMP)水平的影响.采用Western blot实验检测A~D组AGS细胞内LC3和P62蛋白的表达水平.通过Ad-mCherry-GFP-LC3B染色检测AGS细胞内自噬流的变化.结果 Dap以浓度依赖性的方式显著抑制AGS细胞的存活率(F=321.50,t=12.44~34.77,P<0.05),处理48 h时AGS细胞的IC50约为90μmol/L.Dap处理48 h后,随Dap浓度的增加,A~E组AGS细胞数量逐渐减少,扭曲和皱缩形状的AGS细胞逐渐增多.随着Dap浓度的升高,A~D组AGS细胞内ROS水平逐渐增高.C和D组AGS细胞中JC-1绿色/红色荧光强度比值显著高于A组(F=10.92,t=3.09、4.96,P<0.05).Western blot实验结果表明,B~D组与A组相比,细胞内LC3B/LC3A 比值显著增高(F=36.46,t=3.17~9.78,P<0.05),P62的表达也显著升高(F=109.90,t=12.38~16.78,P<0.05).Ad-mCherry-GFP-LC3B染色发现,Dap可抑制自噬小体与溶酶体的融合,导致自噬流阻断.结论 Dap能够抑制胃癌细胞的增殖,其作用机制可能与诱导胃癌细胞内ROS大量产生以及阻断自噬流有关.
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