摘要目的 探究核受体共激活因子4(NCOA4)对KRAS G12C突变型胰腺癌靶向抑制剂获得性耐药的影响及其机制.方法 体外培养人胰腺癌CFPAC-1细胞、PANC-1细胞、MIA-PaCa-2细胞,利用MIA-PaCa-2细胞构建MIA-PaCa-2阿达格拉西布耐药细胞系(Res-MIA),并使用慢病毒构建敲低NCOA4基因的MIA-PaCa-2耐药细胞系(Res-MIA-KD).将Res-MIA细胞分为a、d组,Res-MIA-KD细胞分为b、c组,向c和d组中加入阿达格拉西布(2 μmol/L)进行处理,a和b组不加入药物处理.再将MIA-PaCa-2细胞分为A、B、C组,Res-MIA细胞分为D、E、F组,A、D组为对照组,B、E组为索托拉西布(2 μmol/L)处理组,C、F组为阿达格拉西布(2 μmol/L)处理组.通过转录组测序技术检测MIA-PaCa-2细胞与 Res-MIA细胞间的差异基因表达,通过CCK-8实验检测各组细胞的细胞活力,通过蛋白免疫印迹实验检测各组细胞中NCOA4和FTH1的相对表达水平,通过Transwell实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力.将雄性BALB/c裸鼠分为Ⅰ～Ⅳ组,Ⅰ、Ⅳ组裸鼠胰腺原位注射Res-MIA细胞,Ⅱ、Ⅲ组裸鼠胰腺原位注射Res-MIA-KD细胞,从第14天开始,Ⅲ、Ⅳ组裸鼠每周2次腹腔注射阿达格拉西布生理盐水溶液(10 mg/kg),Ⅰ、Ⅱ组裸鼠同时腹腔注射等体积生理盐水,第28天时分离肿瘤并计算肿瘤体积和质量.结果 CCK-8实验结果显示,经0、10、50、100、1 000、2 000 nmol/L阿达格拉西布处理72 h后,CFPAC-1细胞和PANC-1细胞的细胞活力无显著变化(P＞0.05),MIA-PaCa-2细胞的细胞活力随阿达格拉西布浓度升高而显著降低(F=239.24,tLSD=3.68～30.10,P＜0.05);经 0、10、50、100、1 000、2 000 nmol/L 索托拉西布和阿达格拉西布处理72 h后,Res-MIA细胞的细胞活力无显著变化(P＞0.05);a、d组的细胞活力无显著差异(P＞0.05),b、c组细胞活力显著低于 a、d组(P＜0.05),c组细胞活力显著低于b组(P＜0.05).转录组测序结果显示,Res-MIA细胞中NCOA4基因表达水平显著高于MIA-PaCa-2细胞(P＜0.05).蛋白免疫印迹实验结果显示,B组和C组细胞中NCOA4蛋白相对表达水平显著低于A组,D组显著高于A组,E组显著低于D组(F=366.20,t=4.69～22.71,P＜0.05);B、C组细胞中FTH1相对蛋白表达水平显著低于A组,D组显著高于A组,E、F组显著高于D组(F=702.16,t=7.36～49.15,P＜0.05);Res-MIA-KD 细胞中 NCOA4 和 FTH1 蛋白相对表达水平显著低于 Res-MIA细胞(t=16.27、92.26,P＜0.05).Transwell实验结果显示,Res-MIA细胞的细胞迁移数目和细胞侵袭数目显著低于Res-MIA-KD细胞(t=9.83、7.19,P＜0.05).动物实验结果显示,Ⅰ、Ⅳ组裸鼠肿瘤体积与质量无显著差异(P＞0.05),Ⅱ、Ⅲ组裸鼠肿瘤体积与质量显著低于Ⅰ、Ⅳ组(P＜0.05),Ⅲ组裸鼠肿瘤体积与质量显著低于Ⅱ组(P＜0.05).结论 KRAS G12C突变型胰腺癌可通过NCOA4介导的铁自噬增强其对靶向药物阿达格拉西布的耐药性,抑制NCOA4表达可恢复耐药胰腺癌细胞对阿达格拉西布的敏感性.