换一批绿豆象实时荧光定量PCR内参基因的筛选
Selection and validation of candidate reference genes for gene expression analysis in Callosobruchus chinensis(Coleoptera:Bruchidae)by qRT-PCR
摘要绿豆象Callosobruchus chinensis是一种世界性分布的害虫,对绿豆、豇豆等豆科作物的产量与品质造成严重影响.本研究旨在筛选出适合分析绿豆象不同发育阶段以及成虫不同组织中稳定表达的内参基因,根据绿豆象转录组测序以及相关参考文献报道,筛选出8个候选内参基因(β-Actin、β-Tubulin、α-Tubulin、AK、GAPDH、RPL40、Hsc70、eEF1-α),采用qRT-PCR技术分析在绿豆象不同发育阶段(幼虫、蛹、雌雄成虫)以及成虫不同组织中的(触角、头、腹、足、翅)各候选基因的表达量;利用GeNorm、NormFinder、BestKeeper和在线网站RefFinder并结合△Ct值评估8个候选内参基因的稳定性.结果显示,在绿豆象不同发育阶段以及成虫不同组织中,各候选内参基因Ct值和跨度均不同,表明各候选内参基因表达量存在差异.不同算法综合比较内参基因稳定性以及GeNorm软件最佳内参基因数目的分析显示,在绿豆象虫不同发育阶段中推荐采用β-Act、β-Tub作为内参基因,而在绿豆象成虫不同组织中推荐采用β-Tub、α-Tub作为内参基因,这有利于在绿豆象的基因表达研究中取得更为可靠、准确的数据.
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关键词
绿豆象实时荧光定量PCR内参基因不同发育阶段组织基因稳定表达Callosobruchus chinensisqRT-PCRendogenous reference genesdevelopmental stagetissuegene expression stability
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-0858.2024.01.17
发布时间
2024-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
现代农业产业技术体系（CARS-08-G10）
国家重点研发计划（2021YFD1600603-01）
山西省现代农业产业技术体系建设(杂粮)(2022-03)（2022-03）
山西省自然科学基金（20210302124166）
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