西方蜜蜂CKI1蛋白的分子特征和基因时空表达谱
Molecular feature and gene spatio-temporal expression profile of Apis mellifera CKI1 protein
摘要本研究对西方蜜蜂Apis mellifera细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1(Cyclin dependent kinase inhibitor1,CKI1)基因AmCKI1进行表达验证,并解析AmCKI1蛋白的理化性质和分子特征,进而测定工蜂不同组织和发育阶段AmCKI1的表达谱,旨在为进一步的功能研究提供参考和基础.通过PCR和Sanger测序验证AmCKI1的表达.使用相关软件预测AmCKI1的理化性质和分子特征,并进行系统进化分析.采用RT-qPCR检测AmCKI1在工蜂的触角、脑、咽下腺、中肠、毒腺、表皮和脂肪体等7个不同组织,卵、幼虫、预蛹、蛹和1日龄、2日龄、6日龄、12日龄、15日龄和17日龄成虫中的相对表达量.结果显示,AmCKI1在工蜂中真实表达.AmCKI1的分子式为C1104H1793N333O331S7,分子量约为25.26 kDa,脂溶系数为71.88,等电点为10.18,平均亲水系数为-0.674,可同时定位于细胞核、线粒体和细胞质;AmCKI1含32个磷酸化位点,但不含典型的跨膜结构域和信号肽;西方蜜蜂和其他6种蜂的CKI1蛋白均包含1个CDI结构域和3个相同的保守基序;西方蜜蜂与小蜜蜂Apis florea的CKI同源性最高.AmCKI1在西方蜜蜂工蜂的脑、咽下腺、中肠、触角、毒腺、表皮和脂肪体中均有表达但表达量无显著差异(P>0.05);AmCKI1在卵、3日龄幼虫、7日龄和8日龄预蛹及12日龄蛹中差异表达,在卵和预蛹中的表达量显著高于3日龄幼虫和12日龄蛹中的表达量(P<0.05);AmCKI1在工蜂的1日龄、2日龄、6日龄、12日龄、15日龄和17日龄成虫体内差异表达,在17日龄成虫中的表达量最高且显著高于1日龄、2日龄、6日龄、12日龄和15日龄成虫体内的表达量.AmCKI1是潜在的胞内蛋白和亲水性蛋白,CKI1在西方蜜蜂、小蜜蜂、欧洲熊蜂Bombus terrestris、美洲东部熊蜂Bombus impatiens、黑大蜜蜂Apis laboriosa、东方蜜蜂Apis ceranae和大蜜蜂Apis dorsata中高度保守,西方蜜蜂与小蜜蜂的CKI1同源性最高,AmCKI1在工蜂卵和17日龄成虫中特异性高表达.
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