摘要[目的]本研究旨在通过检测东方蜜蜂Apis cerana的croquemort基因AcCrq的时空表达谱并解析AcCRQ蛋白理化性质和分子特性,为AcCRQ的功能研究提供参考和基础.[方法]RT-PCR扩增AcCrq的编码序列(Coding sequence,CDS).利用相关软件预测AcCRQ蛋白的理化性质和分子特性,鉴定东方蜜蜂和其他物种AcCrq的保守基序和结构域,并比对氨基酸序列和构建系统进化树.[结果]RT-qPCR检测AcCrq在东方蜜蜂工蜂的触角、中肠、脑、咽下腺、脂肪体、毒腺和表皮组织,以及卵、幼虫、预蛹、蛹和不同日龄工蜂成虫中的相对表达量.成功验证到AcCrq,CDS含有1719个核苷酸,可编码572个氨基酸.AcCRQ蛋白的分子量约为65.44 kDa,分子式为C2969H45540N764O864S21,等电点为5.96,平均亲水系数为-0.30,含23个丝氨酸磷酸化位点,9个酪氨酸磷酸化位点和17个苏氨酸磷酸化位点,但不存在典型的信号肽.AcCRQ在黑大蜜蜂Apis laboriosa、小蜜蜂Apis florea、西方蜜蜂Apis mellifera、兰花蜂 Eufriesea mexicana、东南蓝莓蜂Habropoda laboriosa、红壁蜂 Osmia bicornis bicornis 和蓝果园壁蜂Osmia lignaria中具有较高的氨基酸序列一致性;东方蜜蜂与小蜜蜂和西方蜜蜂的CRQ进化距离最近.AcCrq在工蜂成虫触角、中肠、脑、咽下腺、脂肪体、毒腺和表皮中均有表达,但表达量存在差异,触角中AcCrq的表达量显著高于其他组织的表达;AcCrq在东方蜜蜂工蜂卵、幼虫、预蛹和蛹中均有表达,但表达量存在差异,相较于在卵中的表达量,3日龄幼虫和8日龄预蛹中AcCrq的表达量显著降低,而7日龄预蛹和12日龄蛹中AcCrq的表达量下调但不显著;AcCrq在1日龄、2日龄、6日龄、12日龄、15日龄和17日龄工蜂体内均有表达,但表达量也存在差异,1日龄成虫体内AcCrq的表达量均显著高于其他日龄成虫体内的表达量,2和17日龄成虫体内的表达量均低于其他日龄成虫体内的表达量.AcCRQ是潜在的亲水性蛋白但不具分泌功能;东方蜜蜂和其他8个物种的CRQ具有较高的保守性;东方蜜蜂与小蜜蜂和西方蜜蜂的CRQ进化距离最近.[结论]AcCrq在东方蜜蜂工蜂的不同组织和发育阶段动态差异表达.
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