换一批
换一批烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达
Cloning,sequence analysis and prokaryotic expression of cathepsin B gene from Helicoverpa assulta(Guenée)(Lepidoptera:Noctuidae)
摘要利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体.测序结果表明,该片段长度为1 017 bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(GenBank登录号:EF154237).序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5 kDa,等电点为5.96.氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性.将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌B121中表达,电泳检测到一条大约61 kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符.用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1:51 200.通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB.
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