换一批光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因ApSerpin-FA72的克隆、表达及功能验证
Cloning, expression and functional verification of the serine protease inhibitor gene ApSerpin-FA72 from Anatolica polita borealis (Coleoptera:Tenebrionidae)
摘要[目的]本研究旨在对光滑鳖甲Anatolica polita borealis丝氨酸蛋白酶抑制剂基因进行克隆及表达分析,以验证光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能.[方法]利用PCR和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆获得光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因.采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本性质进行预测和分析,同时构建其编码产物的系统进化树;构建光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白重组表达载体,表达、纯化蛋白进行功能验证.[结果]获得光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因ApSerpin-FA72(GenBank登录号:MF188125),其基因编码序列长为1 176 bp,编码由391个氨基酸残基组成的多肽,蛋白理论分子量为43.7 kD,理论等电点为5.14,包含一个由21个氨基酸组成的信号肽.AsSerpin-FA72属亲水蛋白,分泌到胞外发挥作用,可能具有胁迫应答的功能,与赤拟谷盗Triboloum castaneum Serpin的同源性最高.纯化得到的融合蛋白TrxA-ApSerpin-FA72大小约为63.7 kD.功能验证表明,重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72对胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶活性均有抑制作用.[结论]光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达产物对胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶活性具有抑制作用,表明其可能对消化类丝氨酸蛋白酶活性起抑制作用,对其功能活性的验证有助于深入研究ApSerpin-FA72与丝氨酸蛋白酶之间的关系.
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关键词
光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达蛋白纯化功能验证Anatolica polita borealisserine protease inhibitorprokaryotic expressionprotein purificationfunctional verification
分类号
Q966（昆虫生物化学）
栏目名称
DOI
10.16380/j.kcxb.2017.08.002
发布时间
2017-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31460578）
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