换一批烟粉虱MED隐种抑制蛋白基因Btarrestin的克隆及特性分析
Cloning and characterization of arrestin gene Btarrestin in the whitefly Bemisia tabaci MED (Hemiptera: Aleyrodidae)
摘要[目的]明确烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种抑制蛋白基因Btarrestin是否参与吡虫啉耐药性.[方法]根据已有烟粉虱转录组数据,利用RT-PCR克隆Btarrestin的全长序列,进行生物信息学分析.通过qPCR分析Btarrestin在烟粉虱MED隐种各个龄期(卵,1-2龄、3龄、4龄若虫,雌、雄成虫)以及吡虫啉处理(100 mg/L)后成虫中的表达量变化,明确其时空表达模式.利用RNAi技术沉默Btarrestin,观察沉默前后Btarrestin表达量和烟粉虱MED隐种成虫死亡率变化.[结果]成功克隆烟粉虱MED隐种Btarrestin的cDNA序列(GenBank登录号:MK204377),编码区全长1 227bp,编码409个氨基酸,预测所编码的蛋白分子量约为45.33 kD,理论等电点(pI)为8.38.保守结构域分析表明,Btarrestin具有Arrestin_N和Arrestin_C两个超家族保守结构域,符合抑制蛋白家族特征.分子系统树分析表明,Btarrestin与褐飞虱Nilaparvata lugens的Arrestin亲缘关系最近.Btarrestin的表达量随烟粉虱MED隐种的生长发育逐渐升高,成虫期表达量最高.100 mg/L吡虫啉处理成虫24 h后Btarrestin的表达量较对照增加了2.39倍.RNAi干扰Btarrestin后进行生物测定,烟粉虱MED隐种成虫的死亡率上升了31.27％.[结论]Btarrestin可能与烟粉虱MED隐种对吡虫啉的耐药性有关.
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