摘要[目的]保幼激素酸甲基转移酶(juvenile hormone acid methyl transferase,JHAMT)是保幼激素(juvenile hormone,JH)合成通路中的关键限速酶.本研究旨在筛选并验证靶向调控黑腹果蝇Drosophila melanogaster JHAMT转录表达的miRNA,揭示miRNA在JH生物合成中的作用机理.[方法]首先通过miRanda,TargetScan和microT-CDS在线网站对靶向黑腹果蝇JHAMT的miRNA进行预测,取3个网站均能预测到的miRNA作为候选靶向JHAMT的miRNA;利用双荧光素酶系统对候选miRNA与JHAMT的靶向关系进行验证;qRT-PCR检测候选miRNA与JHAMT在黑腹果蝇生长发育中的表达模式;利用qRT-PCR和果蝇GAL4-UAS系统分别检测黑腹果蝇咽侧体中超表达miRNA对JHAMT的表达以及对黑腹果蝇变态发育的影响.[结果]miRanda,TargetScan和microT-CDS分别预测到5,18和16个靶向JHAMT的miRNA,共同预测到4个miRNA,分别是miR-252-5p,miR-277-3p,miR-1002-5p 和 miR-987-5p.双荧光素酶检测结果表明,miR-252-5p mimics可显著降低野生型JHAMT 3'UTR荧光素酶报告基因载体所表达的荧光素酶活性,而JHAMT 3'UTR区中miR-252-5p结合位点突变后,该抑制作用被解除.qRT-PCR检测结果表明,miR-252-5p与JHAMT在黑腹果蝇卵、幼虫及预蛹期的转录表达模式相反.咽侧体中超表达miR-252后,可显著降低JHAMT和JH初级反应基因Kr-h1的表达水平;且表现出类似JH缺失的表型,如化蛹时间推迟、体重变轻以及蛹期死亡增加.[结论]miR-252-5p可通过靶向作用于JHAMT参与JH生物合成调控,从而影响果蝇变态发育.