抑制葡萄糖氧化酶基因降低黏虫幼虫对苏云金芽孢杆菌侵染的抗性
Inhibition of glucose oxidase gene decreases the resistance of Mythimna separata(Lepidoptera:Noctuidae)larvae to Bacillus thuringiensis infection
摘要[目的]本研究旨在探讨葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOX)在黏虫Mythimna separata发育、消化和免疫防御中的作用.[方法]采用转录组测序技术克隆了黏虫GOX基因的cDNA序列.qRT-PCR检测该GOX基因在黏虫不同发育阶段(1-6龄幼虫、蛹和1日龄成虫)和4龄第1天幼虫不同组织(前肠、中肠、后肠、下唇腺、马氏管、脂肪体和表皮)、以及取食用不同浓度(0.01%,0.1%,1%和10%)葡萄糖溶液浸泡10 s的玉米叶片及饥饿和再取食条件下的4龄第1天幼虫中的特异性表达模式.通过RNAi和生物测定研究该GOX基因在黏虫对苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis抗性中的功能.[结果]克隆获得了一条新的长2 187 bp的黏虫GOX基因MsGOX cDNA序列(GenBank登录号:KY348779),其开放阅读框长1 821 bp,编码606个氨基酸,预测分子量为66.4 kD.发育表达谱结果表明MsGOX在黏虫不同发育阶段表达量不同,在4龄幼虫期表达量最高;组织表达谱结果表明MsGOX在黏虫4龄第1天幼虫各组织中均有表达,在下唇腺中表达量最高.饲喂幼虫不同浓度葡萄糖对MsGOX转录的诱导效果不同,在葡萄糖浓度为10%时,该基因的表达水平达到最高.随着饥饿时间的延长,4龄第1天幼虫中MsGOX的表达水平逐渐升高,并在饥饿24 h时达到高峰,饥饿后再用玉米叶片饲喂幼虫,MsGOX的表达水平逐渐回升.注射dsMsGOX 48 h后,MsGOX的表达水平较对照(注射dsEGFP)降低了 88.3%;与同一时间点的对照相比,注射dsMsGOX后48和72 h幼虫的体重、体长和消化系数均显著降低,苏云金芽孢杆菌侵染48和72 h提高了幼虫的校正死亡率.[结论]MsGOX可能参与了黏虫中肠的消化和抗菌,研究结果为进一步研究黏虫MsGOX的功能并提出新的黏虫防治策略提供了依据.
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